ADAMTS-L2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-411325-ACT

ADAMTSL2 codifica ADAMTS-L2, una glicoproteina secreta della matrice extracellulare appartenente alla famiglia ADAMTS-like, priva di attività proteasica catalitica, ma in grado di modulare l’organizzazione della matrice e la segnalazione cellula–matrice. ADAMTS-L2 partecipa alla biologia delle microfibrille extracellulari ed è funzionalmente collegata alla regolazione del transforming growth factor-β (TGF-β) tramite interazioni con matrici ricche di fibrillina, influenzando l’architettura tissutale e l’omeostasi meccanica. Un’alterazione dell’espressione o della funzione di ADAMTSL2 è associata a fenotipi del tessuto connettivo e a un rimodellamento della matrice deregolato, rendendola rilevante per studi su programmi di tipo fibrotico, morfogenesi dello sviluppo e biologia delle cellule stromali. La sua localizzazione extracellulare supporta inoltre l’indagine della segnalazione paracrina, della deposizione di matrice e delle dinamiche di rimodellamento in sistemi cellulari umani e in organoidi.

ADAMTS-L2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ADAMTSL2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

ADAMTS-L2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ADAMTSL2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ADAMTSL2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di ADAMTS-L2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ADAMTSL2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da ADAMTS-L2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via ADAMTS-L2 nelle cellule tumorali con espressione di ADAMTSL2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.