Plasmide CRISPR/Cas9 KO ADAM4 (m): sc-418990

Présentation

Adam4 code pour ADAM4, un membre de la famille ADAM (« a disintegrin and metalloprotease ») impliquée dans la protéolyse à proximité de la membrane ainsi que dans les interactions cellule–cellule et cellule–matrice. Les protéines ADAM peuvent moduler le clivage (shedding) du domaine extracellulaire des récepteurs de surface et des molécules d’adhérence, influençant la dynamique de signalisation, les signaux inflammatoires et le remodelage tissulaire. Dans les modèles murins, ADAM4 est étudiée dans le contexte de la régulation, dépendante des protéases, de processus développementaux et reproductifs, ainsi que de la régulation microenvironnementale du comportement cellulaire. La dérégulation de la protéolyse médiée par la famille ADAM est largement pertinente pour le remodelage pathologique et une signalisation aberrante, offrant un point d’entrée mécanistique pour analyser des phénotypes entraînés par l’activité protéasique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ADAM4 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Adam4 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Adam4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Adam4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ADAM4.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Adam4 pour l'étude de la signalisation de ADAM4, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Adam4 essentiels à la fonction de ADAM4
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Adam4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ADAM4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le ADAM4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Adam4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ADAM4 plasmide HDR (m) et le ADAM4 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Adam4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Adam4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.