ACTR-IB Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-418975

Panoramica

Acvr1b codifica il recettore dell’activina A di tipo 1B (ACTR-IB/ALK4), un recettore chinasi Ser/Thr della superfamiglia del TGF-β che trasduce i segnali delle activine e di ligandi correlati. In seguito al legame con il ligando e alla formazione del complesso recettoriale, ACTR-IB fosforila SMAD2/3 per regolare programmi trascrizionali che controllano le decisioni sul destino cellulare, la proliferazione, la differenziazione e il rimodellamento tissutale. Nei sistemi murini, la segnalazione dipendente da Acvr1b si integra con MAPK e altre vie specifiche del contesto, contribuendo a modellare risposte di sviluppo e di omeostasi. La disregolazione della segnalazione activina/SMAD è comunemente utilizzata in ambito sperimentale per modellare meccanismi pertinenti a fibrosi, infiammazione, regolazione metabolica e fenotipi oncogeni.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ACTR-IB (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Acvr1b in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Acvr1b insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Acvr1b a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ACTR-IB.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Acvr1b per lo studio della segnalazione di ACTR-IB, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Acvr1b critici per la funzione di ACTR-IB
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Acvr1b per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ACTR-IB CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal ACTR-IB CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Acvr1b. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ACTR-IB Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR ACTR-IB (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Acvr1b per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Acvr1b definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.