Plasmide CRISPR/Cas9 KO ACTR-IB (m): sc-418975

Présentation

Acvr1b code pour le récepteur de l’activine A de type 1B (ACTR-IB/ALK4), un récepteur sérine/thréonine kinase de la superfamille du TGF-β qui transmet les signaux des activines et de ligands apparentés. Après liaison du ligand et formation du complexe de récepteurs, ACTR-IB phosphoryle SMAD2/3 afin de réguler des programmes transcriptionnels contrôlant les décisions de destin cellulaire, la prolifération, la différenciation et le remodelage tissulaire. Dans les systèmes murins, la signalisation dépendante d’Acvr1b s’intègre aux voies MAPK et à d’autres voies spécifiques du contexte pour façonner les réponses développementales et homéostatiques. La dérégulation de la signalisation activine/SMAD est couramment utilisée pour modéliser, en conditions expérimentales, des mécanismes pertinents pour la fibrose, l’inflammation, la régulation métabolique et des phénotypes oncogéniques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ACTR-IB (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Acvr1b dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Acvr1b, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Acvr1b à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ACTR-IB.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Acvr1b pour l'étude de la signalisation de ACTR-IB, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Acvr1b essentiels à la fonction de ACTR-IB
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Acvr1b pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ACTR-IB plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le ACTR-IB plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Acvr1b. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ACTR-IB plasmide HDR (m) et le ACTR-IB (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Acvr1b pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Acvr1b définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.