ACTG2 Double Nickase Plasmid (h): sc-400007-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ACTG2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ACTG2 Double-Nickase-Plasmid (h) und ACTG2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ACTG2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ACTG2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400007-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ACTG2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400007-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ACTG2 kodiert das glatte Muskel‑Gamma‑Aktin, einen zentralen Bestandteil des Aktin‑Zytoskeletts, der in der viszeralen glatten Muskulatur die Erzeugung kontraktiler Kräfte, die Zellform und die Mechanotransduktion unterstützt. ACTG2‑haltige Filamente interagieren mit Myosin und Aktin‑bindenden Proteinen, um den Zytoskelett‑Umbau, Adhäsionsdynamik und nachgeschaltete Signalwege der RhoA/ROCK‑ sowie der kalziumabhängigen kontraktilen Signalwege zu koordinieren. Eine intakte ACTG2‑Funktion ist entscheidend für die Motilität der glatten Muskulatur im Gastrointestinal‑ und Urogenitaltrakt sowie für die Aufrechterhaltung der Gewebearchitektur. Pathogene Varianten oder eine fehlregulierte Expression von ACTG2 wurden mit Phänotypen viszeraler Myopathien in Verbindung gebracht, darunter Erkrankungen, die die intestinale Peristaltik und die Funktion der Harnwege beeinträchtigen, wodurch ACTG2 ein relevantes Ziel für die Modellierung krankheitsbedingter Mechanismen des glatten Muskel‑Zytoskeletts darstellt.
ACTG2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ACTG2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ACTG2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ACTG2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ACTG2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.