ACSL4 Double Nickase Plasmid (h): sc-401649-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ACSL4 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ACSL4 Double-Nickase-Plasmid (h) und ACSL4 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ACSL4 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: ACSL4: sc-365230
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ACSL4 Double Nickase Plasmid (h) | sc-401649-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ACSL4 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401649-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ACSL4 (Acyl-CoA-Synthetase der Long-Chain-Familie, Mitglied 4) ist ein membranassoziiertes Enzym, das bevorzugt mehrfach ungesättigte Fettsäuren, darunter Arachidonsäure, aktiviert, indem es sie zu Acyl‑CoA-Thioestern umwandelt, die anschließend in Phospholipide eingebaut werden. Durch die Prägung des Phospholipid-Remodelings und der Dynamik von Lipidtröpfchen beeinflusst ACSL4 die Verfügbarkeit von Eicosanoid-Vorstufen sowie umfassendere Netzwerke der Lipidsignalgebung. Die ACSL4-Aktivität ist eng mit der Redoxbiologie und der Anfälligkeit für Ferroptose verknüpft, da sie peroxidierbare PUFA-Phospholipide anreichert und damit Schnittstellen zu Signalwegen bildet, die oxidativen Stress und Membranintegrität kontrollieren. Eine veränderte Expression oder Funktion von ACSL4 wurde mit einer dysregulierten Lipidstoffwechselregulation sowie mit Kontexten der Krebsbiologie, Neurobiologie und inflammatorischen Signalübertragung in Verbindung gebracht, was ACSL4 zu einem nützlichen Knotenpunkt für mechanistische Studien macht.
ACSL4 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ACSL4-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ACSL4 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ACSL4-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ACSL4-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.