ACK Plasmide Double Nickase (h): sc-401482-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ACK Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ACK Double Nickase Plasmid (h) e il ACK Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira TNK2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ACK Antibody (A-11): sc-28336
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ACK Plasmide Double Nickase (h) | sc-401482-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ACK Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401482-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TNK2 codifica la Activated Cdc42-associated kinase 1 (ACK), una tirosin-chinasi non recettoriale che funge da hub di segnalazione a valle dei recettori tirosin-chinasici e delle piccole GTPasi, inclusa Cdc42. ACK modula l’endocitosi e il traffico dei recettori tramite interazioni con la clatrina e le proteine adattatrici, e contribuisce alla dinamica del citoscheletro, all’adesione cellulare e alla migrazione. Si interfaccia con vie quali la segnalazione EGFR/RTK, PI3K–AKT e le cascate MAPK, plasmando le risposte cellulari alla stimolazione da fattori di crescita. Un’attività TNK2/ACK deregolata e alterazioni dell’espressione sono state riportate in contesti di segnalazione associati al cancro e in altre patologie legate a un traffico RTK aberrante e al rimodellamento delle reti di chinasi.
ACK Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus TNK2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di TNK2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di TNK2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con TNK2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.