Plásmido Doble Nickase (m) Acid Ceramidase: sc-419216-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)Acid Ceramidase consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Acid Ceramidase (m) y el plásmido de doble nickasa Acid Ceramidase (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Asah1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) Acid Ceramidase | sc-419216-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) Acid Ceramidase | sc-419216-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen Asah1 del ratón codifica la ceramidasa ácida, una hidrolasa lisosomal que desacetila la ceramida para generar esfingosina y ácidos grasos libres, controlando así el equilibrio entre la señalización mediada por ceramida y por esfingosina-1-fosfato. Mediante la regulación del recambio de esfingolípidos, la ceramidasa ácida influye en la composición de la membrana, la homeostasis endolisosomal, la autofagia y las vías de respuesta al estrés que se entrecruzan con la apoptosis y la señalización inflamatoria. La alteración del catabolismo de ceramida dependiente de ASAH1 perturba la depuración lisosomal de lípidos y modifica los reservorios de esfingolípidos bioactivos, procesos implicados en la neurodegeneración y en fenotipos sistémicos de almacenamiento lipídico. Por tanto, Asah1 es un nodo clave para estudiar la función lisosomal y las redes de señalización impulsadas por esfingolípidos en modelos celulares y *in vivo* en ratón.
Acid Ceramidase El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Asah1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Asah1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Asah1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Asah1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.