ACBP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419950

Übersicht

Dbi kodiert das Acyl-CoA-bindende Protein (ACBP), einen konservierten Lipid-Chaperon, der mittel- und langkettige Acyl-CoA-Ester bindet und deren intrazelluläre Verfügbarkeit reguliert. In Mauszellen unterstützt ACBP den Fettsäuretransport und die metabolische Homöostase, indem es die β‑Oxidation, die Lipidsynthese und das Remodeling von Membranlipiden beeinflusst, und es kann Signalnetzwerke modulieren, die mit Energiebalance und zellulären Stressantworten verknüpft sind. Aufgrund dieser Funktionen wird DBI/ACBP häufig in Signalwegen untersucht, die den Lipidstoffwechsel mit der mitochondrialen Funktion, Autophagie und Entzündung verbinden. Eine fehlregulierte Acyl‑CoA‑Handhabung und veränderte Lipidflüsse sind für Modelle der Stoffwechselstörung, Neurobiologie und der Lipidabhängigkeit von Tumorzellen relevant, wodurch Dbi ein nützliches Ziel für mechanistische Studien ist.

Das ACBP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Dbi-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Dbi-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Dbi nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ACBP-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Dbi-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ACBP-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Dbi-Exone abzielen, die für die ACBP-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Dbi-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ACBP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom ACBP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Dbi-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ACBP HDR-Plasmid (m) und ACBP HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Dbi-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Dbi-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.