Partículas Lentivirales de Activación (h) ABP1: sc-410674-LAC

AOC1 codifica la amina oxidasa 1 dependiente de cobre (ABP1/DAO), una enzima secretada y asociada a la membrana que cataliza la desaminación oxidativa de aminas primarias, incluidas la histamina y las poliaminas, generando aldehídos, amoníaco y peróxido de hidrógeno. Mediante la regulación del recambio de aminas biógenas y la producción de especies reactivas de oxígeno, AOC1 influye en la señalización inflamatoria, la función de la barrera epitelial y la homeostasis redox celular. La actividad de ABP1 se interseca con vías vinculadas a la inmunidad mucosa, la biología vascular y la remodelación de la matriz extracelular, y se ha informado de una expresión alterada en contextos que involucran inflamación, alergia y fenotipos del microambiente tumoral. Estas características hacen de AOC1 una diana relevante para estudios mecanísticos del metabolismo de la histamina, las respuestas al estrés oxidativo y la comunicación célula–célula en sistemas modelo humanos.

Las partículas de activación lentiviral ABP1 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de AOC1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral ABP1 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción AOC1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de ABP1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo AOC1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.