ABHD7 Double Nickase Plasmid (h): sc-408425-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ABHD7 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ABHD7 Double-Nickase-Plasmid (h) und ABHD7 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf EPHX4 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ABHD7 Double Nickase Plasmid (h) | sc-408425-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ABHD7 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-408425-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Humanes ABHD7 (auch als EPHX4 bezeichnet) kodiert eine Serinhydrolase mit α/β‑Hydrolase‑Domäne, die voraussichtlich am Lipid- und Esterstoffwechsel in zellulären Membranen beteiligt ist. Als Bestandteil des breiteren Serinhydrolase-Netzwerks kann die Aktivität von ABHD7 die Dynamik der Lipidsignalgebung, die Membranhomöostase sowie den metabolischen Crosstalk beeinflussen, der Stressantworten und inflammatorische Signalwege moduliert. Eine veränderte Regulation lipidmetabolischer Enzyme ist häufig mit dysregulierter Proliferation, beeinträchtigter Bewältigung von oxidativem Stress und Veränderungen bei Zellzustandsübergängen assoziiert, wodurch ABHD7 einen relevanten Knotenpunkt für mechanistische Studien zur metabolischen und signalwegbezogenen Umprogrammierung darstellt. Die Charakterisierung der ABHD7-Funktion unterstützt die Forschung zu enzymgekoppelten Lipidwegen und deren Verknüpfungen mit krankheitsassoziierten zellulären Phänotypen in humanen Modellen.
ABHD7 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des EPHX4-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von EPHX4 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die EPHX4-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit EPHX4-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.