Plasmide CRISPR d'Activation (h) ABHD14B: sc-410211-ACT

ABHD14B humain (abhydrolase domain containing 14B) code une protéine de la famille des hydrolases à sérine, supposée participer au métabolisme des lipides et des petites molécules via une activité hydrolytique, contribuant à l’homéostasie cellulaire et à la signalisation induite par le stress. En tant que membre de la superfamille des hydrolases α/β, ABHD14B est généralement associée à des voies qui régulent le remodelage des lipides membranaires, la fonction mitochondriale et l’équilibre rédox, des processus susceptibles d’influencer la prolifération et les réponses inflammatoires. Une expression altérée des hydrolases de cette classe a été liée à une dérégulation métabolique et à la biologie tumorale, faisant d’ABHD14B une cible pertinente pour des études mécanistiques dans des systèmes où la gestion des lipides et la bioénergétique sont perturbées. L’étude fonctionnelle d’ABHD14B soutient la recherche sur la manière dont le contrôle enzymatique des signaux dérivés des lipides s’articule avec les programmes transcriptionnels et les transitions d’état cellulaire.

ABHD14B Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ABHD14B sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ABHD14B Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ABHD14B dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ABHD14B, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ABHD14B. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ABHD14B natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ABHD14B au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ABHD14B dans les cellules tumorales présentant une expression de ABHD14B silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.