ABCB5 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404392-ACT

ABCB5 kodiert einen ATP-Binding-Cassette-(ABC)-Transporter, der an einem ATP-abhängigen transmembranen Efflux kleiner Moleküle und Xenobiotika beteiligt ist und dessen Aktivität mit zellulärer Entgiftung sowie der Aufrechterhaltung der Homöostase des Membrantransports verknüpft ist. In menschlichen Geweben wurde die ABCB5-Expression mit stammzellähnlichen Zellprogrammen und der Regulation der intrazellulären Wirkstoffverteilung in Verbindung gebracht, mit nachgeschalteten Effekten auf Stressantwort-Signalwege, den Differenzierungszustand und Überlebenspfade. Eine dysregulierte ABCB5-Expression wurde in mehreren Krebskontexten beschrieben und wird im Hinblick auf ihre Beziehung zu Tumorzellplastizität, chemoresistenzassoziierten Phänotypen und der Biologie der Melanozyten-Linie untersucht. Diese Eigenschaften machen ABCB5 zu einem nützlichen Ziel, um die transporter-vermittelte Regulation des Zellzustands und der Reaktion auf Umwelt- oder metabolische Stressoren zu untersuchen.

ABCB5 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ABCB5-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

ABCB5 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ABCB5-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ABCB5-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen ABCB5-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ABCB5-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von ABCB5-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des ABCB5-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ABCB5-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.