AATK Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-418928

Descripción general

Aatk codifica la tirosina quinasa asociada a la apoptosis (AATK), una quinasa de serina/treonina enriquecida en el sistema nervioso que favorece la diferenciación neuronal, la extensión de neuritas y las decisiones de supervivencia durante el desarrollo y en condiciones de estrés. La actividad de AATK se conecta con programas de apoptosis y de señalización por factores de crecimiento, influyendo en la remodelación del citoesqueleto y en respuestas transcripcionales que determinan el destino celular. La desregulación de la expresión o de la señalización de AATK se ha vinculado con alteraciones en la maduración neuronal y con una mayor vulnerabilidad a la degeneración, lo que la hace relevante para estudios de mecanismos del neurodesarrollo y de la biología de enfermedades neurodegenerativas. En sistemas murinos, Aatk actúa como un nodo manejable para diseccionar el control dependiente de quinasas de la morfología neuronal y de las vías de muerte celular inducida por estrés.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO AATK (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Aatk en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Aatk junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Aatk tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína AATK.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Aatk para la investigación de la señalización de AATK, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Aatk críticos para la función de AATK
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Aatk para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido AATK CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido AATK CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Aatk. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR AATK (m) y el plásmido HDR AATK (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Aatk para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Aatk definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.