Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
53BP1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m2): sc-424212-KO-2
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- 53BP1 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m2) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico 53BP1, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: p-53BP1 Anticuerpo (38.Ser 25): sc-135748
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
53BP1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m2) | sc-424212-KO-2 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Trp53bp1 codifica 53BP1, un mediador asociado a la cromatina de la respuesta al daño del ADN que se recluta rápidamente a las roturas de doble cadena mediante el reconocimiento de marcas de histonas y la señalización por ubiquitina. 53BP1 favorece la unión de extremos no homólogos (NHEJ) y limita la resección de los extremos del ADN, influyendo así en la elección de la vía entre NHEJ y la recombinación homóloga durante la reparación. Coordina la señalización de los puntos de control, la estabilidad genómica y la recombinación de cambio de clase en células B, y su disfunción se asocia con un aumento de la inestabilidad cromosómica y con respuestas alteradas al estrés de replicación. En modelos murinos, la alteración de Trp53bp1 se utiliza ampliamente para estudiar el mantenimiento del genoma, las redes supresoras de tumores y el equilibrio de las vías de reparación asociadas a BRCA1.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO 53BP1 (m2) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Trp53bp1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Trp53bp1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Trp53bp1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína 53BP1.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Trp53bp1 para la investigación de la señalización de 53BP1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Trp53bp1 críticos para la función de 53BP1
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Trp53bp1 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido 53BP1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido 53BP1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Trp53bp1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR 53BP1 (m) y el plásmido HDR 53BP1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Trp53bp1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Trp53bp1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.