Plasmide CRISPR/Cas9 KO 5-LO (h): sc-401239

Présentation

ALOX5 code la 5‑lipoxygénase (5‑LO), une dioxygénase à fer non hémique qui catalyse les premières étapes engagées du métabolisme de l’acide arachidonique vers le leucotriène A4, lequel est ensuite converti en leucotriènes bioactifs. L’activité de la 5‑LO est régulée par les flux calciques cellulaires, l’association membranaire avec FLAP (ALOX5AP), des voies de signalisation dépendantes de la phosphorylation et l’état rédox, ce qui la relie à l’activation de l’immunité innée et aux réseaux de médiateurs lipidiques inflammatoires. La signalisation des leucotriènes via les récepteurs CysLT et BLT module la chimiotaxie des leucocytes, la perméabilité vasculaire et la libération de cytokines, plaçant ALOX5 au sein de voies pertinentes pour l’asthme et l’inflammation allergique, l’athérosclérose et l’inflammation associée aux tumeurs. Une expression dérégulée d’ALOX5 ou une altération du flux de la voie est également utilisée comme lecture mécanistique dans des études portant sur le stress oxydant, la polarisation des macrophages et les interactions (« crosstalk ») des eicosanoïdes avec les prostanoïdes dérivés de la cyclooxygénase.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO 5-LO (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ALOX5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ALOX5, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ALOX5 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine 5-LO.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ALOX5 pour l'étude de la signalisation de 5-LO, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ALOX5 essentiels à la fonction de 5-LO
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ALOX5 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le 5-LO plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le 5-LO plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ALOX5. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le 5-LO plasmide HDR (h) et le 5-LO (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ALOX5 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ALOX5 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.