Plasmide CRISPR d'Activation (h) 5-LO: sc-401239-ACT

Le gène humain **ALOX5** code la **5‑lipoxygénase (5‑LO)**, une dioxygénase à fer non hémique qui catalyse la conversion de l’acide arachidonique en intermédiaires des leucotriènes, notamment le **5‑HPETE** et le **leucotriène A4**. Cette étape enzymatique est au cœur de la biosynthèse des leucotriènes et coordonne la signalisation des médiateurs lipidiques inflammatoires via des voies autocrines et paracrines dans les cellules myéloïdes et d’autres populations leucocytaires. L’activité de la 5‑LO s’inscrit dans le réseau d’interactions des eicosanoïdes, dépend de l’activation par le calcium et de dynamiques de localisation subcellulaire qui modulent les réponses en aval, notamment la production de cytokines et la chimiotaxie. Une signalisation **ALOX5/5‑LO** dérégulée a été associée à la biologie des maladies inflammatoires et au remodelage du microenvironnement immunitaire, ce qui en fait un nœud pertinent pour des études mécanistiques d’immunométabolisme et de signalisation lipidique.

5-LO Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ALOX5 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

5-LO Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ALOX5 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ALOX5, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de 5-LO. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ALOX5 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de 5-LO au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie 5-LO dans les cellules tumorales présentant une expression de ALOX5 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.