Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
4E-BP1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420149
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- 4E-BP1 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico 4E-BP1, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: 4E-BP1 Anticuerpo (P-1): sc-9977
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
4E-BP1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-420149 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
El gen murino **Eif4ebp1** codifica **4E-BP1**, un represor de la traducción dependiente del cap que se une a **EIF4E** y limita el ensamblaje del complejo **eIF4F**, modulando así el inicio de la traducción de los ARNm en respuesta a señales de nutrientes y factores de crecimiento. 4E-BP1 es un efector clave aguas abajo del eje **PI3K–AKT–mTORC1**; la fosforilación por **mTORC1** libera el secuestro de EIF4E y favorece la traducción selectiva de transcritos implicados en el crecimiento celular, el metabolismo y la adaptación al estrés. A través de este punto de control traduccional, **Eif4ebp1** contribuye a la regulación de la autofagia, la progresión del ciclo celular y los programas de proteostasis. La señalización desregulada de 4E-BP1 se utiliza ampliamente como lectura molecular de la actividad aberrante de la vía mTOR en modelos de biología del cáncer, disfunción metabólica y procesos del neurodesarrollo y neurodegenerativos.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO 4E-BP1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Eif4ebp1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Eif4ebp1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Eif4ebp1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína 4E-BP1.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Eif4ebp1 para la investigación de la señalización de 4E-BP1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Eif4ebp1 críticos para la función de 4E-BP1
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Eif4ebp1 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido 4E-BP1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido 4E-BP1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Eif4ebp1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR 4E-BP1 (m) y el plásmido HDR 4E-BP1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Eif4ebp1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Eif4ebp1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.