Plásmido CRISPR de Activación (m) 3632451O06Rik: sc-426549-ACT

El gen murino 3632451O06Rik codifica una proteína en gran medida no caracterizada y con una anotación funcional limitada, lo que lo convierte en un objetivo útil para cartografiar redes de regulación génica y fenotipos celulares dependientes del contexto. La evidencia emergente a nivel de transcrito sugiere que 3632451O06Rik podría participar en procesos de control del estado celular como la proliferación, la adaptación al estrés y la diferenciación, en los que cambios modestos en la expresión pueden modificar la salida de las vías. Dado que el gen no está bien integrado en mapas de señalización curados, la perturbación controlada resulta valiosa para vincular la expresión de 3632451O06Rik con programas transcripcionales aguas abajo y módulos de interacción proteica. Estos estudios pueden respaldar biología relevante para enfermedades al identificar asociaciones con firmas de expresión génica aberrantes observadas en contextos de inflamación, neurobiología y modelos de cáncer, sin implicar utilidad clínica.

3632451O06Rik El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de 3632451O06Rik sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

3632451O06Rik El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus 3632451O06Rik en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional 3632451O06Rik, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de 3632451O06Rik. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo 3632451O06Rik y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de 3632451O06Rik en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía 3632451O06Rik en células tumorales con expresión de 3632451O06Rik silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.