Plasmide CRISPR d'Activation (h) 20S Proteasome α7: sc-401897-ACT

PSMA7 code la sous-unité α7 du protéasome 20S, un composant structurel essentiel de la particule centrale 20S qui soutient l’assemblage et le mécanisme de « gating » (ouverture/fermeture) de la chambre protéolytique dans le système ubiquitine–protéasome. En permettant le renouvellement dépendant de l’ATP des substrats polyubiquitinylés via le protéasome 26S, PSMA7 contribue à la protéostasie, à la progression du cycle cellulaire, au traitement des antigènes pour leur présentation par le CMH de classe I, ainsi qu’à la régulation des voies de signalisation sensibles au stress. L’activité du protéasome recoupe la signalisation NF-κB via la dégradation d’IκB et influence les voies de contrôle qualité des protéines liées au stress oxydatif et aux réponses aux protéines mal repliées. La dérégulation des sous-unités du protéasome, dont PSMA7, est fréquemment étudiée dans des contextes de prolifération altérée, de signalisation inflammatoire et de modèles de neurodégénérescence associés à l’agrégation protéique.

20S Proteasome α7 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PSMA7 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

20S Proteasome α7 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PSMA7 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PSMA7, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de 20S Proteasome α7. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PSMA7 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de 20S Proteasome α7 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie 20S Proteasome α7 dans les cellules tumorales présentant une expression de PSMA7 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.