Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
15-LO2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419090
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- 15-LO2 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico 15-LO2, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: 15-LO2 Anticuerpo (F-10): sc-376795
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
15-LO2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-419090 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Alox8 codifica la araquidonato 15-lipooxigenasa 2 (15-LO2), una dioxigenasa de hierro no hemo que oxigena ácidos grasos poliinsaturados para generar mediadores lipídicos bioactivos. En tejidos de ratón, los oxilipinos derivados de 15-LO2 pueden modular el equilibrio redox, la remodelación de los lípidos de membrana y la señalización inflamatoria a través de redes de eicosanoides y de peroxidación lipídica. La actividad de Alox8 se entrecruza con las vías de la inmunidad innata y la biología de la barrera epitelial al moldear perfiles locales de mediadores que influyen en la producción de citocinas y el reclutamiento de leucocitos. La señalización lipídica dependiente de lipooxigenasas, cuando está desregulada, se ha vinculado a fenotipos inflamatorios y respuestas al estrés metabólico, lo que convierte a Alox8 en un nodo útil para estudiar circuitos de mediadores lipídicos relevantes para la enfermedad.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO 15-LO2 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Alox8 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Alox8 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Alox8 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína 15-LO2.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Alox8 para la investigación de la señalización de 15-LO2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Alox8 críticos para la función de 15-LO2
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Alox8 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido 15-LO2 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido 15-LO2 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Alox8. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR 15-LO2 (m) y el plásmido HDR 15-LO2 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Alox8 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Alox8 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.