Plasmide Double Nickase (h) 14-3-3 η: sc-402892-NIC

YWHAH code la protéine adaptatrice humaine 14-3-3 η, membre d’une famille conservée qui se lie à des motifs phosphosérine/phosphothréonine afin de réguler la localisation, la stabilité et l’activité de nombreux partenaires protéiques. Par ces interactions, 14-3-3 η intègre des nœuds de signalisation contrôlant la progression du cycle cellulaire, l’apoptose, les réponses au stress et l’organisation du cytosquelette, avec des liens marqués avec les voies MAPK/ERK, PI3K–AKT et d’autres voies dépendantes de kinases. En modulant des complexes dépendants de la phosphorylation, YWHAH contribue au développement neuronal et à la fonction synaptique, ainsi qu’au maintien de la protéostasie et de la fidélité de la signalisation en général. Une dérégulation de la signalisation de la famille 14-3-3 a été associée à des phénotypes neuropsychiatriques et neurodégénératifs, ainsi qu’à des programmes modifiés de croissance et de survie pertinents pour la biologie du cancer, ce qui fait de YWHAH une cible utile pour des études mécanistiques des voies de signalisation.

14-3-3 η Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus YWHAH dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de YWHAH. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de YWHAH. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de YWHAH.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.