14-3-3 η Plasmide Double Nickase (h): sc-402892-NIC

YWHAH codifica la proteina adattatrice umana 14-3-3 η, membro di una famiglia conservata che si lega a motivi fosfoserina/fosfotreonina per regolare la localizzazione, la stabilità e l’attività di numerose proteine bersaglio. Attraverso queste interazioni, 14-3-3 η integra nodi di segnalazione che controllano la progressione del ciclo cellulare, l’apoptosi, le risposte allo stress e l’organizzazione del citoscheletro, con collegamenti rilevanti alle vie MAPK/ERK, PI3K–AKT e ad altri circuiti guidati da chinasi. Modulando complessi dipendenti dalla fosforilazione, YWHAH contribuisce allo sviluppo neuronale e alla funzione sinaptica, oltre che alla proteostasi generale e alla fedeltà della segnalazione. Un’alterazione della segnalazione della famiglia 14-3-3 è stata associata a fenotipi neuropsichiatrici e neurodegenerativi e a programmi di crescita e sopravvivenza modificati rilevanti per la biologia del cancro, rendendo YWHAH un bersaglio utile per studi meccanicistici delle vie di segnalazione.

14-3-3 η Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus YWHAH nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di YWHAH. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di YWHAH. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con YWHAH interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.