Plásmido Doble Nickase (h) 12-LO: sc-403010-NIC

El gen humano **ALOX12** codifica la **12-lipoxigenasa (12-LO)**, una dioxigenasa de hierro no hemo que cataliza la oxigenación del ácido araquidónico para generar **ácido 12-hidroperoxieicosatetraenoico** y mediadores lipídicos derivados que modulan la señalización inflamatoria. Los oxilipinos derivados de 12-LO influyen en la activación y agregación plaquetaria, en las respuestas vasculares y epiteliales y en procesos sensibles al estado redox mediante la modulación de MAPK, NF-κB y redes relacionadas de eicosanoides. La actividad de ALOX12 se cruza con vías de peroxidación lipídica y remodelado de membranas, afectando la migración y diferenciación celular y las respuestas al estrés oxidativo. La desregulación de la señalización ALOX12/12-LO se ha asociado con estados proinflamatorios y con fenotipos metabólicos y cardiovasculares, lo que respalda su estudio en modelos celulares relevantes para la enfermedad.

12-LO El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ALOX12 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ALOX12. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ALOX12. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ALOX12 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.