γENaC CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422827

Übersicht

Scnn1g kodiert die γ‑Untereinheit des epithelialen Natriumkanals (γENaC), einen entscheidenden Faktor für den amiloridempfindlichen Na⁺‑Einstrom über apikale Membranen in epithelialen Geweben. Zusammen mit den α‑ und β‑Untereinheiten reguliert γENaC den transepithelialen Natriumtransport, der die Homöostase der Flüssigkeit an der Atemwegsoberfläche, die renale Natriumrückresorption und die Aufrechterhaltung des Flüssigkeitsvolumens beeinflusst. Die Kanalaktivität wird durch proteolytische Prozessierung und Membran‑Trafficking gesteuert und ist in aldosteronresponsive Programme sowie nachgeschaltete Ionentransport‑Netzwerke integriert, etwa die an die Na⁺/K⁺‑ATPase gekoppelte Salzhandhabung. Eine Fehlregulation von ENaC‑Untereinheiten wurde mit veränderter epithelialer Hydratation und Phänotypen des Salzhaushalts in Verbindung gebracht, was die Relevanz von Scnn1g für Studien zur Physiologie der Atemwege und der Niere sowie zu entsprechenden Ionentransportstörungen unterstreicht.

Das γENaC CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Scnn1g-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Scnn1g-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Scnn1g nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die γENaC-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Scnn1g-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der γENaC-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Scnn1g-Exone abzielen, die für die γENaC-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Scnn1g-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom γENaC CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom γENaC CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Scnn1g-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das γENaC HDR-Plasmid (m) und γENaC HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Scnn1g-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Scnn1g-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.