Plasmide Double Nickase (m) γ-catenin: sc-421210-NIC

Jup code la γ-caténine (plakoglobine), une protéine à répétitions armadillo qui relie au cytosquelette les jonctions d’adhérence dépendantes des cadhérines et les desmosomes, contribuant au maintien de l’intégrité des tissus épithéliaux et cardiaques chez la souris. Elle participe à l’assemblage des jonctions, à la mécanotransduction et au dialogue avec la signalisation Wnt/β-caténine via une compétition pour des partenaires de liaison tels que TCF/LEF et les complexes de cadhérines. Une altération de la fonction ou de la localisation de la γ-caténine est associée à une diminution de l’adhérence cellule–cellule, à une différenciation aberrante et à des modifications de la signalisation qui influencent le remodelage tissulaire. Des études in vivo et sur cellules relient Jup à des phénotypes de type cardiomyopathie et à des défauts de barrière épithéliale, ce qui en fait un nœud pertinent pour explorer la biologie des jonctions et l’intégration des signaux.

γ-catenin Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Jup dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Jup. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Jup. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Jup.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.