Plasmide CRISPR d'Activation (h) γ2 Tubulin: sc-400328-ACT

TUBG2 code la tubuline γ2 humaine, un membre spécialisé de la superfamille des tubulines qui contribue à la nucléation et à l’organisation des microtubules au niveau des centres organisateurs des microtubules grâce à des interactions avec le complexe en anneau de la γ-tubuline (γ-TuRC). En régulant l’assemblage du fuseau mitotique, la fonction du centrosome et la dynamique globale des microtubules, la tubuline γ2 influence la progression du cycle cellulaire, la fidélité de la mitose et les processus de transport intracellulaire. Des perturbations des voies de nucléation des microtubules peuvent entraîner une instabilité chromosomique ainsi que des altérations des programmes neuronaux et prolifératifs, faisant de TUBG2 une cible pertinente pour l’étude de la régulation du cytosquelette dans des contextes développementaux et associés aux maladies.

γ2 Tubulin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TUBG2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

γ2 Tubulin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TUBG2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TUBG2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de γ2 Tubulin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TUBG2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de γ2 Tubulin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie γ2 Tubulin dans les cellules tumorales présentant une expression de TUBG2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.