βPAK CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422108

Übersicht

Pak3 kodiert βPAK (p21-aktivierte Kinase 3), eine Serin/Threonin-Kinase, die nachgeschaltet von den GTPasen der Rho-Familie RAC1 und CDC42 aktiviert wird. βPAK koordiniert den Umbau des Aktinzytoskeletts, das Neuritenauswachsen und die synaptische Signalübertragung über Signalwege, die sich mit der MAPK/ERK-Signalkaskade, der Dynamik der Zelladhäsion und der aktivitätsabhängigen neuronalen Plastizität überschneiden. Bei der Maus ist die Funktion von Pak3 insbesondere für Studien zur Entwicklung des Nervensystems und zur Funktion neuronaler Schaltkreise relevant, da veränderte PAK-Signalisierung die Morphologie dendritischer Dornen und die synaptische Konnektivität beeinflussen kann. Eine Fehlregulation der PAK-Familien-Signalisierung wurde mit neuroentwicklungsbezogenen und kognitiven Phänotypen in Verbindung gebracht, was ihren Einsatz in mechanistischen Studien zur neuronalen Signalübertragung und zur Kontrolle des Zytoskeletts unterstützt.

Das βPAK CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Pak3-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Pak3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Pak3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die βPAK-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Pak3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der βPAK-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Pak3-Exone abzielen, die für die βPAK-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Pak3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom βPAK CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom βPAK CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Pak3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das βPAK HDR-Plasmid (m) und βPAK HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Pak3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Pak3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.