Plasmide CRISPR/Cas9 KO βB3-crystallin (m): sc-419827

Présentation

Crybb3 code la βB3-cristalline, une protéine structurale de la famille des cristallines β/γ qui contribue à l’architecture des cellules des fibres du cristallin, à l’ordre à longue portée et au maintien de la transparence. La βB3-cristalline participe à l’assemblage des complexes de cristallines et soutient la stabilité protéique ainsi que les propriétés réfractives au cours du développement et de la maturation du cristallin. Une perturbation de l’homéostasie des cristallines peut favoriser l’agrégation des protéines, un déséquilibre redox et la diffusion de la lumière par le cristallin, reliant Crybb3 aux voies qui régissent la protéostasie et les réponses au stress cellulaire dans le cristallin. Dans des modèles murins, les altérations de la composition en cristallines sont couramment étudiées dans le contexte de la dégénérescence du cristallin et de phénotypes de type cataracte.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO βB3-crystallin (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Crybb3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Crybb3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Crybb3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine βB3-crystallin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Crybb3 pour l'étude de la signalisation de βB3-crystallin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Crybb3 essentiels à la fonction de βB3-crystallin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Crybb3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le βB3-crystallin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le βB3-crystallin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Crybb3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le βB3-crystallin plasmide HDR (m) et le βB3-crystallin (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Crybb3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Crybb3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.