βB2-crystallin Double Nickase Plasmid (h): sc-403626-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das βB2-crystallin Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- βB2-crystallin Double-Nickase-Plasmid (h) und βB2-crystallin Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CRYBB2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: βB2-crystallin: sc-376006
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
βB2-crystallin Double Nickase Plasmid (h) | sc-403626-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
βB2-crystallin Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403626-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CRYBB2 kodiert das humane βB2‑Kryistallin, ein wichtiges Strukturprotein der Augenlinse, das die Architektur der Linsenfaserzellen stützt und die langfristige Transparenz erhält. Als Mitglied der β/γ‑Kryistallin‑Superfamilie trägt βB2‑Kryistallin zu einer dichten Proteinpackung und den Brechungseigenschaften bei und unterstützt zugleich die Proteostase durch chaperonähnliche Interaktionen, die unter oxidativem und altersbedingtem Stress die Aggregation begrenzen. Eine veränderte CRYBB2‑Expression oder Destabilisierung des Proteins steht mit einer gestörten Linsenhomöostase und kataraktassoziierten Phänotypen in Zusammenhang und macht CRYBB2 zu einem geeigneten Modell für die Untersuchung von Proteinstabilität, Stressantworten und Programmen der Linsendifferenzierung. βB2‑Kryistallin bietet zudem ein gut handhabbares System, um zu untersuchen, wie konservierte Kryistallin‑Netzwerke auf Redox‑Ungleichgewichte und proteotoxischen Stress in okulären und nicht‑okulären Zellkontexten reagieren.
βB2-crystallin Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CRYBB2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CRYBB2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CRYBB2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CRYBB2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.