β4 Tubulin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400058

Übersicht

TUBB4A kodiert β4-Tubulin, eine in Neuronen angereicherte β-Tubulin-Isoform, die zusammen mit α-Tubulin zu Mikrotubuli polymerisiert und damit die Architektur der mitotischen Spindel, den intrazellulären Transport und das Neuritenwachstum unterstützt. Der dynamische Auf- und Abbau von Mikrotubuli bildet die Grundlage für Prozesse wie den axonalen Transport und die Umgestaltung des Zytoskeletts und ist in Signalwege eingebunden, die die Progression des Zellzyklus und die neuronale Differenzierung koordinieren. Eine veränderte TUBB4A-Funktion stört die Assemblierung und Stabilität von Mikrotubuli und verknüpft dieses Gen in genetischen Studien mit neuroentwicklungsbedingten und neurodegenerativen Phänotypen. Als zentraler Bestandteil des Zytoskeletts bietet β4-Tubulin einen mechanistischen Ansatzpunkt, um mikrotubuliabhängige Signalgebung und die Anfälligkeit gegenüber zytoskelettalem Stress in menschlichen Zellmodellen zu untersuchen.

Das β4 Tubulin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des TUBB4A-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des TUBB4A-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von TUBB4A nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die β4 Tubulin-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von TUBB4A-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der β4 Tubulin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf TUBB4A-Exone abzielen, die für die β4 Tubulin-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere TUBB4A-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom β4 Tubulin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom β4 Tubulin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des TUBB4A-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das β4 Tubulin HDR-Plasmid (h) und β4 Tubulin HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von TUBB4A-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten TUBB4A-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.