Plásmido Doble Nickase (h) β3Gn-T3: sc-411457-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)β3Gn-T3 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa β3Gn-T3 (h) y el plásmido de doble nickasa β3Gn-T3 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a B3GNT3. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) β3Gn-T3 | sc-411457-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) β3Gn-T3 | sc-411457-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
B3GNT3 codifica la glicosiltransferasa humana β3Gn-T3, una enzima localizada en el aparato de Golgi que cataliza la transferencia de N-acetilglucosamina con enlace β1,3 a aceptores de glicanos para extender estructuras de poli‑N‑acetil-lactosamina en glicoproteínas y glicolípidos. Mediante la regulación de la elaboración de N‑ y O‑glicanos, β3Gn-T3 contribuye a la maduración de glicoproteínas, la unión a lectinas y las interacciones célula–célula o célula–matriz que influyen en la adhesión y la señalización. La expresión o actividad alteradas de B3GNT3 se han asociado con cambios en los patrones de glicosilación descritos en múltiples contextos patológicos, incluidos el remodelado de glicanos asociado a tumores y procesos relacionados con el sistema inmunitario. Como resultado, B3GNT3 se estudia con frecuencia en flujos de trabajo de glicobiología que examinan redes de glicosilación del Golgi, el tráfico de receptores y las interacciones con la matriz extracelular.
β3Gn-T3 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus B3GNT3 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de B3GNT3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de B3GNT3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con B3GNT3 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.