Plasmide CRISPR/Cas9 KO β2B Tubulin (h): sc-400059

Présentation

TUBB2B code la β2B-tubuline, un isotype de β-tubuline enrichi dans les neurones qui forme un hétérodimère avec l’α-tubuline pour assembler les microtubules et préserver l’intégrité du cytosquelette. La dynamique des microtubules, gouvernée par les polymères de tubuline, régule l’organisation du fuseau mitotique, le trafic intracellulaire, la croissance des neurites et la migration neuronale, reliant ainsi TUBB2B à des processus fondamentaux tels que la division cellulaire et le neurodéveloppement. En tant que composant du cytosquelette des microtubules, la β2B-tubuline s’inscrit dans des voies qui contrôlent le transport axonal et la stratification corticale, via des interactions avec les protéines associées aux microtubules et les complexes moteurs. Des variations pathogènes de TUBB2B ont été associées à des tubulinopathies et à des malformations du développement cortical, offrant une porte d’entrée génétique pour étudier les mécanismes cytosquelettiques à l’origine de phénotypes neurodéveloppementaux.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO β2B Tubulin (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TUBB2B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TUBB2B, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TUBB2B à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine β2B Tubulin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TUBB2B pour l'étude de la signalisation de β2B Tubulin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de TUBB2B essentiels à la fonction de β2B Tubulin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TUBB2B pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le β2B Tubulin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le β2B Tubulin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TUBB2B. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le β2B Tubulin plasmide HDR (h) et le β2B Tubulin (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TUBB2B pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TUBB2B définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.