β-1,3-Gal-T4 Double Nickase Plasmid (m): sc-424825-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das β-1,3-Gal-T4 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- β-1,3-Gal-T4 Double-Nickase-Plasmid (m) und β-1,3-Gal-T4 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf B3galt4 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
β-1,3-Gal-T4 Double Nickase Plasmid (m) | sc-424825-NIC | 20 µg | $410.00 |
Das murine B3galt4 kodiert β-1,3-Gal-T4, eine im Golgi lokalisierte Glykosyltransferase, die β1,3-Galaktosylierungsschritte katalysiert, die für die Biosynthese von Glykolipiden und Glykoproteinen wichtig sind. Über seine Rolle beim Aufbau komplexer Glykane trägt B3galt4 zur Organisation von Membran-Mikrodomänen, zum Rezeptortransport (Trafficking) und zu Prozessen der Zell-Zell-Kommunikation bei, die mit dem Glycosphingolipidstoffwechsel und umfassenderen Glykosylierungswegen verknüpft sind. Veränderte Glykosylierungsmuster sind häufig mit Veränderungen der neuronalen Funktion, der Immun-Signalgebung und von Tumorzell-Phänotypen assoziiert, wodurch B3galt4 ein relevanter Knotenpunkt für die Untersuchung glykom-abhängiger Regulation ist. Eine Störung von B3galt4 ist daher nützlich, um zu prüfen, wie spezifische Glykanstrukturen Signalgebung und Adhäsion in entwicklungs- und krankheitsrelevanten zellulären Kontexten modulieren.
β-1,3-Gal-T4 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des B3galt4-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von B3galt4 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die B3galt4-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit B3galt4-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.