α_2C-AR Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419025

Panoramica

Adra2c codifica il recettore adrenergico α2C (α2C-AR) del topo, un recettore accoppiato a proteine G inibitorio per le catecolamine che si accoppia principalmente a Gi/Go per sopprimere l’attività dell’adenilil ciclasi, ridurre la segnalazione cAMP/PKA e modulare la funzione dei canali ionici. Attraverso la regolazione del rilascio presinaptico di neurotrasmettitori e del flusso simpatico, l’α2C-AR influenza la trasmissione sinaptica, il tono vascolare e la segnalazione neuroendocrina responsiva allo stress. L’attivazione del recettore può inoltre coinvolgere vie dipendenti dalle subunità βγ che influenzano la segnalazione MAPK/ERK e l’eccitabilità cellulare. Una segnalazione adrenergica disregolata che coinvolge ADRA2C è stata associata a fenotipi neuropsichiatrici e a processi cardiovascolari, rendendo questo gene rilevante per studi sulla regolazione autonoma e sulla funzione dei circuiti neurali.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO α2C-AR (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Adra2c in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Adra2c insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Adra2c a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina α2C-AR.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Adra2c per lo studio della segnalazione di α2C-AR, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Adra2c critici per la funzione di α2C-AR
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Adra2c per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal α2C-AR CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal α2C-AR CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Adra2c. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal α2C-AR Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR α2C-AR (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Adra2c per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Adra2c definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.