Plasmide CRISPR/Cas9 KO α_2C-AR (m): sc-419025

Présentation

Adra2c code le récepteur α2C-AR de la souris, un récepteur aux catécholamines couplé aux protéines G inhibitrices, qui se couple principalement à Gi/Go pour inhiber l’activité de l’adénylyl cyclase, réduire la signalisation cAMP/PKA et moduler la fonction des canaux ioniques. En régulant la libération présynaptique de neurotransmetteurs et le tonus sympathique, α2C-AR influence la transmission synaptique, le tonus vasculaire et la signalisation neuroendocrinienne induite par le stress. L’activation du récepteur peut également engager des voies dépendantes des sous-unités βγ qui affectent la signalisation MAPK/ERK et l’excitabilité cellulaire. Une signalisation adrénergique dérégulée impliquant ADRA2C a été associée à des phénotypes neuropsychiatriques et à des processus cardiovasculaires, ce qui rend ce gène pertinent pour l’étude de la régulation autonome et du fonctionnement des circuits neuronaux.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO α2C-AR (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Adra2c dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Adra2c, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Adra2c à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine α2C-AR.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Adra2c pour l'étude de la signalisation de α2C-AR, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Adra2c essentiels à la fonction de α2C-AR
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Adra2c pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le α2C-AR plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le α2C-AR plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Adra2c. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le α2C-AR plasmide HDR (m) et le α2C-AR (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Adra2c pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Adra2c définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.