Plasmide CRISPR/Cas9 KO α_2A-AR (m): sc-419023

Présentation

Adra2a code le récepteur adrénergique α2A (α2A-AR) de la souris, un récepteur adrénergique couplé à Gi/Go qui répond à la noradrénaline et à l’adrénaline en inhibant l’adénylate cyclase et en réduisant l’AMPc intracellulaire. Via la signalisation des RCPG, α2A-AR module l’activité des canaux ioniques, la libération présynaptique de neurotransmetteurs et des programmes de phosphorylation en aval dépendants de la PKA, qui façonnent la transmission synaptique et l’excitabilité neuronale. Dans les tissus périphériques, α2A-AR contribue à la régulation du tonus sympathique et des réponses cellulaires contrôlées par les catécholamines. Une signalisation adrénergique dérégulée impliquant ADRA2A a été associée à des phénotypes neurocomportementaux et à des traits cardiométaboliques, ce qui rend ce récepteur pertinent pour les études de la régulation de l’axe du stress et de la physiologie autonome.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO α2A-AR (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Adra2a dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Adra2a, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Adra2a à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine α2A-AR.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Adra2a pour l'étude de la signalisation de α2A-AR, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Adra2a essentiels à la fonction de α2A-AR
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Adra2a pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le α2A-AR plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le α2A-AR plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Adra2a. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le α2A-AR plasmide HDR (m) et le α2A-AR (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Adra2a pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Adra2a définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.