α_1D-AR CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419022

Übersicht

Adra1d kodiert den murinen α1D‑adrenergen Rezeptor (α1D‑AR), einen G‑Protein‑gekoppelten Rezeptor, der überwiegend an Gq/11 koppelt und dadurch die Phospholipase‑C‑Signalgebung, die Inositolphosphat‑Produktion, die Mobilisierung intrazellulären Ca2+ sowie die Aktivierung von PKC stimuliert. Über diese Signalwege beeinflusst α1D‑AR die Kontraktion glatter Muskulatur, den Gefäß‑ und Harnwegstonus sowie eine übergeordnete autonome Regulation, mit nachgeschalteten Effekten auf die MAPK/ERK‑Signalgebung und transkriptionelle Programme. Die Expression von Adra1d und die Dynamik seiner Signalübertragung werden häufig im Kontext gewebespezifischer adrenerger Responsivität und der Beiträge einzelner Rezeptorsubtypen zur physiologischen Homöostase untersucht. Eine Fehlregulation der adrenergen GPCR‑Signalgebung wurde in präklinischen Modellen mit kardiometabolischen und neuroverhaltensbezogenen Phänotypen in Verbindung gebracht, was Adra1d zu einem relevanten Ziel für mechanistische Studien stressresponsiver Signalwege macht.

Das α1D-AR CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Adra1d-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Adra1d-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Adra1d nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die α1D-AR-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Adra1d-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der α1D-AR-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Adra1d-Exone abzielen, die für die α1D-AR-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Adra1d-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom α1D-AR CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom α1D-AR CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Adra1d-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das α1D-AR HDR-Plasmid (m) und α1D-AR HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Adra1d-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Adra1d-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.