α_1A-AR Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-401726-NIC

ADRA1A codifica o receptor adrenérgico alfa1A humano (α1A-AR), um receptor acoplado à proteína G (GPCR) que se acopla principalmente a Gq/11 para estimular a sinalização da fosfolipase C, a mobilização de Ca2+ dependente de trifosfato de inositol e a ativação da proteína quinase C. Por meio dessas vias, o α1A-AR regula a contração do músculo liso, o tônus vascular e a neurotransmissão, com efeitos a jusante na sinalização MAPK/ERK e em respostas transcricionais mais amplas. A expressão de ADRA1A e o equilíbrio de sua sinalização contribuem para o controle adrenérgico da fisiologia cardiovascular e urogenital, e sua desregulação é relevante em condições que envolvem alteração da sinalização simpática e remodelamento tecidual. Como um GPCR de superfície celular com saídas de segundos mensageiros bem definidas, é comumente utilizado para estudar dessensibilização do receptor, sinalização enviesada (biased) e comunicação cruzada (cross-talk) com outras vias de GPCR e de fatores de crescimento.

α1A-AR O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus ADRA1A em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de ADRA1A. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função ADRA1A. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com ADRA1A interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.