α_1A-AR CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401726-ACT

ADRA1A は、ヒトのα1Aアドレナリン受容体（α1A-AR）をコードします。α1A-AR は G タンパク質共役型受容体（GPCR）で、主に Gq/11 に共役してホスホリパーゼCを活性化し、細胞内 Ca2+ 濃度を上昇させ、PKC 依存性のシグナル伝達を促進します。下流では、カルシウム依存性経路および MAPK/ERK シグナルを介して、平滑筋の収縮性、分泌、神経の興奮性などが調節されます。α1A-AR はカテコールアミンによる血管トーヌスおよび泌尿生殖器系平滑筋機能の調節に関与し、そのシグナルはより広範なアドレナリン作動性ストレス応答ネットワークとも交差します。アドレナリン受容体の発現やシグナル動態の変化は、心血管系および神経生理学的表現型との関連が示唆されており、受容体依存的な転写応答やセカンドメッセンジャー応答を対象とした研究を後押ししています。

α1A-AR CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ADRA1Aの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

α1A-AR CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ADRA1A 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はADRA1A転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性α1A-ARの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のADRA1A遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるα1A-AR依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびADRA1A発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるα1A-AR経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。