Plasmide CRISPR/Cas9 KO α-sarcoglycan (h): sc-403837

Présentation

SGCA code l’α-sarcoglycane humaine, un composant central du sous-complexe des sarcoglycanes au sein du complexe de glycoprotéines associé à la dystrophine, qui stabilise la membrane des cellules musculaires lors de la contraction. En reliant la matrice extracellulaire au cytosquelette cortical, l’α-sarcoglycane contribue à l’intégrité du sarcolemme, à la mécanotransduction et à l’organisation de microdomaines membranaires impliqués dans l’homéostasie musculaire. La perturbation de SGCA désorganise l’assemblage du complexe de la dystrophine, accroît la sensibilité aux lésions induites par la contraction et modifie les voies de signalisation de stress et d’inflammation en aval dans le muscle squelettique et cardiaque. Des variants avec perte de fonction sont associés à des phénotypes de dystrophie musculaire des ceintures, ce qui fait de SGCA une cible couramment utilisée pour modéliser l’instabilité de la membrane musculaire et les voies associées.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO α-sarcoglycan (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SGCA dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SGCA, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SGCA à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine α-sarcoglycan.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SGCA pour l'étude de la signalisation de α-sarcoglycan, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SGCA essentiels à la fonction de α-sarcoglycan
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SGCA pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le α-sarcoglycan plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le α-sarcoglycan plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SGCA. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le α-sarcoglycan plasmide HDR (h) et le α-sarcoglycan (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SGCA pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SGCA définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.