α-parvin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-405769

Übersicht

PARVA kodiert α-Parvin, einen aktinbindenden Adaptor der Fokalkontakte, der mit der integrinverknüpften Kinase (ILK) und PINCH assoziiert, um den IPP‑Komplex zu bilden, der Integrine mit dem Aktinzytoskelett verbindet. Über Interaktionen mit Paxillin und weiteren Adhäsionskomponenten trägt α-Parvin zur Assemblierung von Fokalkontakten, zum zytoskelettalen Umbau und zur Mechanotransduktion während des Zell-Spreadings und der Migration bei. Die PARVA-abhängige Signalgebung ist mit Integrin/FAK-Signalwegen und der durch kleine GTPasen regulierten Aktindynamik verknüpft und unterstützt ein adhäsionsabhängiges Überleben sowie die zelluläre Polarität. Eine Fehlregulation dieser Prozesse ist relevant für Studien zur Invasion von Tumorzellen, zum fibrosebedingten Gewebeumbau sowie zur kardiovaskulären und glatten Muskelbiologie, in denen veränderte Adhäsions- und kontraktile Signalgebung eine Rolle spielt.

Das α-parvin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des PARVA-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des PARVA-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von PARVA nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die α-parvin-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von PARVA-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der α-parvin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf PARVA-Exone abzielen, die für die α-parvin-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere PARVA-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom α-parvin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom α-parvin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des PARVA-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das α-parvin HDR-Plasmid (h) und α-parvin HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von PARVA-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten PARVA-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.