α-actinin-3 Double Nickase Plasmid (h): sc-401486-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das α-actinin-3 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- α-actinin-3 Double-Nickase-Plasmid (h) und α-actinin-3 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ACTN3 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: α-actinin: sc-17829
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
α-actinin-3 Double Nickase Plasmid (h) | sc-401486-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
α-actinin-3 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401486-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ACTN3 kodiert α-Actinin-3, ein Aktin-bindendes Z-Scheiben-Protein, das in schnell kontrahierenden Skelettmuskelfasern angereichert ist. Dort vernetzt es Aktinfilamente und trägt zur Organisation des sarkomerischen Zytoskeletts bei. Durch die Stabilisierung des kontraktilen Apparats sowie die Kopplung an Mechanotransduktion und Programme der Calcium-Handhabung beeinflusst α-Actinin-3 die Muskelkraftentwicklung, die metabolische Aufteilung und adaptive Antworten auf Belastung. Natürliche Loss-of-Function-Varianten in ACTN3 sind im Zusammenhang mit Merkmalen der Muskelleistung und der Faserzusammensetzung breit untersucht, und veränderte α-Actinin-Netzwerke sind für Studien zur myofibrillären Integrität bei neuromuskulären und myopathischen Phänotypen relevant. Als strukturelles Gerüst bietet α-Actinin-3 zudem einen Ansatzpunkt, um Z-Linien-assoziierte Signalwege und Protein-Protein-Interaktionen zu untersuchen, die den Muskelumbau regulieren.
α-actinin-3 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ACTN3-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ACTN3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ACTN3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ACTN3-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.