α-actinin-3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-418972
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- α-actinin-3 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico α-actinin-3, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: α-actinin Antibody (H-2): sc-17829
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
α-actinin-3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-418972 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Actn3 codifica l’α-actinina-3, una proteina sarcomerica legante l’actina, arricchita a livello del disco Z delle fibre muscolari scheletriche a contrazione rapida, dove reticola e stabilizza i filamenti sottili durante la contrazione. Organizzando l’apparato contrattile e contribuendo alla meccanica del sarcomero, l’α-actinina-3 influenza tratti della performance muscolare e proprietà del tipo di fibra legate al metabolismo glicolitico e alla risposta al carico meccanico. La perdita di funzione dell’α-actinina-3 è associata a fenotipi alterati di forza e resistenza muscolare ed è stata studiata nel contesto di miopatie, deperimento muscolare e adattamento all’esercizio o al disuso. Nei modelli murini, Actn3 offre un sistema maneggevole per studiare le reti strutturali miofibrillari e le vie che regolano la contrattilità, il rimodellamento muscolare e le risposte allo stress.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO α-actinin-3 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Actn3 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Actn3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Actn3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina α-actinin-3.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Actn3 per lo studio della segnalazione di α-actinin-3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Actn3 critici per la funzione di α-actinin-3
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Actn3 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal α-actinin-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal α-actinin-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Actn3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal α-actinin-3 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR α-actinin-3 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Actn3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Actn3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.