α-actinin-2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401186

Panoramica

ACTN2 codifica l’α-actinina-2, una proteina legante l’actina modulata dal Ca2+ che reticola l’actina filamentosa e ancora le reti citoscheletriche a strutture di adesione e contrattili. Nel muscolo striato, l’α-actinina-2 è un componente fondamentale del disco Z che organizza l’architettura del sarcomero e sostiene la trasmissione della forza attraverso interazioni con l’actina, complessi associati alla titina e altre proteine scaffold. Oltre ai ruoli strutturali, ACTN2 contribuisce ai percorsi di meccano-trasduzione e di rimodellamento del citoscheletro che influenzano la tensione cellulare, la segnalazione al costamero e l’assemblaggio delle miofibrille. L’alterazione o la variazione genetica di ACTN2 è stata associata a fenotipi di cardiomiopatia e a una funzione muscolare modificata, rendendolo rilevante per studi sull’integrità del sarcomero e sulla segnalazione responsiva allo stress.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO α-actinin-2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ACTN2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ACTN2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ACTN2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina α-actinin-2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ACTN2 per lo studio della segnalazione di α-actinin-2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ACTN2 critici per la funzione di α-actinin-2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ACTN2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal α-actinin-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal α-actinin-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ACTN2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal α-actinin-2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR α-actinin-2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ACTN2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ACTN2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.