α-actinin-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2): sc-430958-KO-2

Übersicht

Actn1 kodiert α-Actinin-1, ein Ca2+-unempfindliches aktinbindendes Protein, das filamentöses Aktin quervernetzt und kortikale Aktinnetzwerke, Stressfasern sowie adhesionsassoziierte zytoskelettale Strukturen organisiert. In Maus-Zellen unterstützt α-Actinin-1 die Dynamik integrinverknüpfter Fokalkontakte, die Mechanotransduktion und die Zellmigration, indem es den Aktin-Umbau mit Signalzentren wie GTPasen der Rho-Familie koordiniert. Durch seine Rolle bei der Aufrechterhaltung der zytoskelettalen Spannung und der Membranstabilität ist ACTN1 für Studien zur Thrombozytenbiogenese und hämostatischen Funktion relevant, da eine veränderte Aktinarchitektur die Prothrombozytenbildung und die zytoskelettale Widerstandsfähigkeit stören kann. Eine dysregulierte α-Actinin-1-Funktion wurde mit erblichen Thrombozytenerkrankungen sowie breiteren Phänotypen in Zusammenhang gebracht, die Adhäsion und Gewebearchitektur betreffen, wodurch Actn1 ein nützliches Ziel zur Modellierung zytoskelettgetriebener Krankheitsmechanismen ist.

Das α-actinin-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Actn1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Actn1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Actn1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die α-actinin-1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Actn1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der α-actinin-1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Actn1-Exone abzielen, die für die α-actinin-1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Actn1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom α-actinin-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom α-actinin-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Actn1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das α-actinin-1 HDR-Plasmid (m) und α-actinin-1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Actn1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Actn1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.