α4a Tubulin Double Nickase Plasmid (h): sc-400016-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das α4a Tubulin Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- α4a Tubulin Double-Nickase-Plasmid (h) und α4a Tubulin Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf TUBA4A abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: α4a Tubulin: sc-134241
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
α4a Tubulin Double Nickase Plasmid (h) | sc-400016-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
α4a Tubulin Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400016-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TUBA4A kodiert α4a-Tubulin, eine zentrale α‑Tubulin-Isoform, die mit β‑Tubulin zu Heterodimeren zusammenlagert und so Mikrotubuli aufbaut, die für die Organisation des Zytoskeletts, den intrazellulären Transport und die Dynamik des mitotischen Spindelapparats erforderlich sind. Der Umbau von Mikrotubuli, der durch die Isoformzusammensetzung von Tubulin und posttranslationale Modifikationen gesteuert wird, beeinflusst die Zellpolarität, den Vesikeltransport und das Neuritenauswachsen über Signalwege, die Motorproteine und mikrotubuliassoziierte Proteine koordinieren. Eine gestörte Tubulin-Homöostase und veränderte Mikrotubuli-Dynamik werden mit neurodegenerativen Phänotypen und Defekten des axonalen Transports in Verbindung gebracht, und TUBA4A-Varianten wurden in genetischen Studien mit einer erhöhten Anfälligkeit für Motoneuronerkrankungen assoziiert. Daher wird TUBA4A häufig in Modellen für zytoskelettalen Stressantworten, neuronale Morphogenese und die Empfindlichkeit gegenüber mikrotubuli-targetierenden Substanzen untersucht.
α4a Tubulin Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des TUBA4A-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von TUBA4A abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die TUBA4A-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit TUBA4A-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.