α3C Tubulin Double Nickase Plasmid (h): sc-400020-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das α3C Tubulin Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- α3C Tubulin Double-Nickase-Plasmid (h) und α3C Tubulin Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf TUBA3C abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
α3C Tubulin Double Nickase Plasmid (h) | sc-400020-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
α3C Tubulin Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400020-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TUBA3C kodiert das humane α3C-Tubulin, einen zentralen Bestandteil der Mikrotubuli, der die Architektur des Zytoskeletts, den intrazellulären Transport und die dynamische Ausbildung des Spindelapparats während der Mitose unterstützt. Durch regulierte Polymerisation mit anderen α/β‑Tubulin-Isoformen trägt α3C‑Tubulin zu mikrotubuliabhängigen Prozessen wie Zellpolarität, Vesikeltransport und Chromosomensegregation bei und ist in Signalwege eingebunden, die den Zellzyklus sowie den Umbau des Zytoskeletts steuern. Veränderte Mikrotubuli-Dynamik und eine veränderte Zusammensetzung der Tubulin-Isotypen werden häufig mit genomischer Instabilität und fehlregulierter Proliferation in Verbindung gebracht, wodurch die Tubulinbiologie generell für Studien zum Verhalten von Krebszellen und zu neuroentwicklungsbezogenen Zellfunktionen relevant ist. Als Teil des Tubulin-Netzwerks eignet sich TUBA3C zudem, um zu untersuchen, wie Störungen des Zytoskeletts die Positionierung von Organellen, Stressantworten und die mitotische Genauigkeit beeinflussen.
α3C Tubulin Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des TUBA3C-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von TUBA3C abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die TUBA3C-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit TUBA3C-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.