Plasmide CRISPR d'Activation (h) α3C Tubulin: sc-400020-ACT

TUBA3C code l’α-tubuline humaine 3C, un isotype central d’α-tubuline qui polymérise avec la β-tubuline pour former des microtubules essentiels à l’organisation du cytosquelette, à l’assemblage du fuseau mitotique et au transport intracellulaire. La dynamique des microtubules coordonne la progression du cycle cellulaire, la fonction du centrosome et le trafic polarisé, influençant des processus tels que la croissance des neurites et la migration cellulaire. Des perturbations de l’expression des tubulines ou de l’homéostasie des microtubules sont associées à l’instabilité chromosomique et à une sensibilité modifiée aux agents ciblant les microtubules, ce qui rend les isotypes de tubuline pertinents dans l’étude de phénotypes prolifératifs et neurobiologiques. En tant que composant structurel du pool de tubuline, l’α-tubuline 3C constitue un point d’entrée exploitable pour disséquer les voies de signalisation et les réponses au stress dépendantes du cytosquelette.

α3C Tubulin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TUBA3C sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

α3C Tubulin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TUBA3C dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TUBA3C, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de α3C Tubulin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TUBA3C natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de α3C Tubulin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie α3C Tubulin dans les cellules tumorales présentant une expression de TUBA3C silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.