Plasmide Double Nickase (h) α1b Tubulin: sc-400021-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) α1b Tubulin correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide α1b Tubulin Double Nickase (h) et le plasmide α1b Tubulin Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant TUBA1B. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: α1b Tubulin Antibody (1H10): sc-134238
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) α1b Tubulin | sc-400021-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) α1b Tubulin | sc-400021-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TUBA1B code l’α1b-tubuline, un composant structurel central des microtubules qui assure l’organisation du cytosquelette, le transport intracellulaire et la dynamique du fuseau mitotique. Les hétérodimères d’α/β-tubuline polymérisent pour réguler des processus tels que la ségrégation des chromosomes, la polarité cellulaire et le trafic vésiculaire, et se situent au cœur des voies qui gouvernent la progression du cycle cellulaire et la signalisation dépendante des microtubules. Des modifications de l’expression des tubulines et de la dynamique des microtubules sont fréquemment associées à l’instabilité chromosomique et à une prolifération aberrante, ce qui fait de TUBA1B un nœud d’intérêt pour étudier les mécanismes à l’origine de la biologie tumorale et des réponses au stress induites par des perturbations du cytosquelette. En tant que gène cytosquelettique largement exprimé, TUBA1B soutient également la recherche sur la différenciation neuronale et le transport axonal, où l’intégrité des microtubules est essentielle.
α1b Tubulin Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus TUBA1B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de TUBA1B. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de TUBA1B. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de TUBA1B.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.