Plasmide Double Nickase (h) α1a Tubulin: sc-400022-NIC

TUBA1A code l’α1a-tubuline, un composant central des microtubules qui polymérisent en filaments dynamiques nécessaires à la formation du fuseau mitotique, au transport intracellulaire et au maintien de la polarité cellulaire. L’α1a-tubuline soutient le remodelage du cytosquelette et les processus dépendants des microtubules tout au long du cycle cellulaire, permettant une ségrégation correcte des chromosomes et la morphogenèse neuronale. Une altération de la fonction de TUBA1A est associée à une perturbation de la dynamique des microtubules et à un développement cortical anormal, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude des troubles du neurodéveloppement et des dérégulations du cytosquelette. En tant qu’isoforme majeure d’α-tubuline chez l’humain, elle est fréquemment utilisée pour étudier l’assemblage et la stabilité des microtubules, ainsi que leurs interactions avec les protéines associées aux microtubules et les complexes moteurs.

α1a Tubulin Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus TUBA1A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de TUBA1A. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de TUBA1A. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de TUBA1A.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.