Plasmide CRISPR d'Activation (h) Zyxin: sc-402295-ACT

Le gène humain **ZYX** code la zyxin, une protéine d’échafaudage à domaine LIM des adhérences focales qui coordonne le remodelage du cytosquelette d’actine et la mécanotransduction aux sites d’adhésion médiée par les intégrines. La zyxin interagit avec VASP/EVL et l’α-actinine pour soutenir le maintien des fibres de stress, l’étalement cellulaire et la migration directionnelle, reliant les signaux de la matrice extracellulaire à la contractilité régulée par les GTPases Rho et aux programmes dépendants de YAP/TAZ. Grâce à sa navette entre les complexes d’adhérence et le noyau, la zyxin peut influencer les réponses transcriptionnelles au stress mécanique et aux perturbations du cytosquelette. Une expression ou une localisation dérégulée de **ZYX** a été associée à une signalisation d’adhérence altérée et à des phénotypes invasifs dans des modèles liés au cancer, ainsi qu’à des rôles plus larges dans le remodelage tissulaire, où les dynamiques cellule–matrice sont déterminantes.

Zyxin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ZYX sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Zyxin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ZYX dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ZYX, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Zyxin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ZYX natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Zyxin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Zyxin dans les cellules tumorales présentant une expression de ZYX silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.