ZSWIM8 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-411661

Übersicht

ZSWIM8 (Zinkfingerprotein mit SWIM-Typ-Domäne 8) kodiert eine Komponente einer E3-Ubiquitin-Ligase, die als Substrat-Adaptor innerhalb eines Cullin-RING-Ubiquitinierungs-Komplexes fungiert und so den Proteinumsatz im Zellkern und im Zytoplasma mitsteuert. Eine zentrale Funktion von ZSWIM8 liegt in der Qualitätskontrolle kleiner RNAs: Es fördert die zielgerichtete miRNA-Degradation (target-directed microRNA degradation, TDMD), um die miRNA-Menge und die nachgeschaltete posttranskriptionelle Genregulation feinzujustieren. Über diese Mechanismen beeinflusst ZSWIM8 Signalwege, die mit Zellzustandswechseln, Entwicklungsprogrammen und stressresponsiven Transkriptionsnetzwerken verknüpft sind. Eine fehlregulierte, ubiquitinvermittelte Proteostase und miRNA-Homöostase infolge veränderter ZSWIM8-Aktivität wurde in Zusammenhängen untersucht, die für die Krebsbiologie und neuroentwicklungsbezogene Phänotypen relevant sind.

Das ZSWIM8 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des ZSWIM8-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des ZSWIM8-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von ZSWIM8 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ZSWIM8-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von ZSWIM8-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ZSWIM8-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf ZSWIM8-Exone abzielen, die für die ZSWIM8-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere ZSWIM8-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ZSWIM8 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom ZSWIM8 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des ZSWIM8-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ZSWIM8 HDR-Plasmid (h) und ZSWIM8 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von ZSWIM8-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten ZSWIM8-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.